淺析核酸檢測PCR試劑盒的作用與意義所在

　　核酸檢測PCR試劑盒和紫外凝膠成像系統(紫外分析儀或手提紫外等)以及移液器都可能影響PCR檢測的質量。PCR儀是控制PCR反應溫度變化的，其溫度和控制時間的準確程度可能會影性PCR檢測質量。移液器取液的準確程度影響反應體系是否能達到反應環境。紫外分析系統對檢測敏感性有明顯的影響。紫外分析系統有3種類型儀器：紫外分析儀、紫外凝膠成像系統、手提紫外燈。紫外分析儀直接用眼睛觀察瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶。
 

　　紫外凝膠成像系統是在計算機上通過攝像系統對瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶進行觀察。手提紫外燈可以在電泳過程中直接對瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶進行觀察，使用方便，分辨率比較低。依據這些儀器的分辨率由高到低順序是紫外分析儀、紫外凝膠成像系統、手提紫外燈。紫外分析儀有時能看到弱陽性擴增帶，在紫外凝膠成像系統上卻看不到。手提紫外燈只有在陽性擴增帶比較亮時才能看到，建議為保證檢測質量建議不用手提紫外燈，可用于臨時的電泳結果觀察。
 

　　核酸檢測PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成cDNA的反轉錄，以及后續的PCR擴增實驗。選用優異的M-MLVRT酶，可以合成大于5kb的cDNA；反轉錄過程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物實驗。
 

　　測定RNA濃度按以下步驟進行操作：
 

　　(1)取1u1RNA原液，放在0.5mlEP管中，加入249u1ddH20，用移液槍反復混勻。
 

　　(2)用ddH20為空白對照，調節A260零點。
 

　　(3)倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液，用ddH20沖洗比色杯，再調節A280零點。
 

　　(4)倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測定A280值。計算A260/A280比值，比值≥1.8，滿足實驗要求。
 

　　(5)RNA原液濃度=A260×稀釋倍數×40(ng/u1)。