有關(guān)RT-PCR試劑盒的那些事，一起來了解下吧

　　RT-PCR試劑盒的組成核酸提取試劑核酸擴(kuò)增或逆轉(zhuǎn)錄-核酸擴(kuò)增試劑產(chǎn)物檢測(cè)試劑(有些使用全自動(dòng)分析儀的PCR方法因其核酸擴(kuò)增和檢測(cè)同時(shí)完成，故無專門的產(chǎn)物檢測(cè)試劑)影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素內(nèi)在因素：原材料、核酸提取方法、方法學(xué)設(shè)計(jì)影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素：擴(kuò)增所需的原材料寡核苷酸引物和探針緩沖液和dNTP聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等PCR反應(yīng)混合物。
 

　　RT-PCR試劑盒除了考慮它的敏感性、特異性、穩(wěn)定性、操作簡(jiǎn)便程度外，還應(yīng)包括：試劑盒提供的試劑覆蓋整個(gè)PCR檢測(cè)試驗(yàn)的程度。如果試劑盒提供了整個(gè)PCR檢測(cè)試驗(yàn)的試劑，表明該試劑盒對(duì)PCR檢測(cè)試驗(yàn)的試劑具有了全程控制性能。相反，PCR檢測(cè)的試劑的質(zhì)量控制程度比較低，意味著檢測(cè)質(zhì)量可控程度低。
 

　　例如：溴化乙錠僅僅起熒光染料的作用，如果在陽(yáng)光下長(zhǎng)時(shí)間的照射下失效了，在紫外燈下發(fā)熒光效能降低，可能會(huì)造成一些弱陽(yáng)性樣品的漏檢，出現(xiàn)假陰性。其它試劑出現(xiàn)問題也是一樣影響檢測(cè)質(zhì)量。試劑盒在生產(chǎn)過程中，有一套試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制體系。每一試劑組分都經(jīng)過靈敏度、敏感性、特異性質(zhì)量控制的檢測(cè)，在有效期內(nèi)能確保每種試劑的質(zhì)量。因此，選擇試劑盒進(jìn)行PCR檢測(cè)是比較理想的控制方法。在PCR檢測(cè)中，建議全部使用試劑盒提供試劑，對(duì)PCR檢測(cè)質(zhì)量控制有益。
 

　　實(shí)驗(yàn)耗材也是影響PCR檢測(cè)質(zhì)量的因素之一。PCR反應(yīng)管薄厚以及傳導(dǎo)熱量性能等直接影響PCR檢測(cè)效果。在熱蓋PCR儀上一般不需要加入礦物油，但有些PCR反應(yīng)管蓋子不嚴(yán)密，導(dǎo)致擴(kuò)增過程中反應(yīng)液水份蒸發(fā)，嚴(yán)重影響檢測(cè)靈敏度。